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【招学员】CRISPR/Cas9 基因编辑技术学习班
发布日期:2017-09-11

CRISPR/Cas9 基因编辑技术学习班(上海站 23-24 

 

背景介绍】

CRISPR/Cas9 是细菌和古细菌在长期选择压力中形成的一种适应性免疫防御,可用来有效抵御病毒及外源DNA的入侵。CRISPRType II已经被广泛用于基因工程,它包含Cas9crRNAtracrRNA,其中crRNA含有能够识别20bp的靶向互补序列。Cas9crRNAtracrRNA组成复合体,识别并结合crRNA互补的序列,然后解开DNA双链,Cas9中的HNH活性位点剪切crRNA的互补DNA链,RuvC活性位点剪切非互补链,最终导致DNA的双链断裂(DSB),进而实现基因的敲除和插入。

目前,CRISPR/Cas9系统已经广泛用于对哺乳动物细胞,细菌,斑马鱼,小鼠,猪,猴的基因编辑。本学习班将详细讲解CRISPR/Cas9基因编辑工具原理,操作流程,理论结合实践,将让大家详细了解到具体如何利用CRISPR/Cas9技术构建基因修饰动物等。学习班将为相关科研工作人员和兴趣爱好者提供了很好的培训资源。

 

【讲师简介】

李博士,德国慕尼黑工业大学海归博士,具有多年丰富的基因编辑实操经验

 

【日程安排】

23日上午

9:00-12:00

基因修饰技术简介

l  基因打靶与基因编辑技术(ZNF, TALENsCRISPR/Cas9)介绍

l  CRISPR/Cas9 结构和特点

l  如何使用 CRISPR/Cas9 系统对特定基因进行敲除或定点插入(详细方法步骤)

l  新基因编辑工具 Cpf1 的结构、特点、工作原理(基因编辑工具知识拓展)

l  如何使用 Cpf1 系统对特定基因进行敲除或定点插入

l  Cpf1 CRISPR/Cas9 的异同

l  Cpf1 的应用和技术展望

l  CRISPR/Cas9 系统介绍的相关值得推荐的视频

CRISPRsgRNA)设计方法和相关网站介绍

l  sgRNA 设计方法和相关网站介绍

实验一:CRISPRsgRNA)的在线设计(请自带可无线上网之笔记本电脑或手机)(在线互动设计演练)

l  sgRNA 设计后挑选 sgRNA 经验和心得分享

23日下午

13:00-18:00

实验二:

gRNA oligos 模板退火

退 gRNA 与线性化 CRISPR/Cas9 载体连接,

连接产物转化到大肠杆菌(DH5α)

转化产物涂板培养

基因编辑质粒 ps330A ps330S 系列如何具体构建和使用

 

CRISPR/Cas9作为基因编辑工具的实验用处、案例

l  Cas9 的多功能系统(如 Cut, Nick, Activate, dCas9-FokI)的详细介绍。

l  利用 CRISPR/Cas9 构建基因修饰小鼠方法与相关基因修饰小鼠模型

l  利用 CRISPR/Cas9 构建基因修饰大动物(猪、猴)方法与相关基因修饰大动物模型介绍

 

24日上午

9:00-12:00

利用 CRISPR/Cas9 技术编辑动物细胞系

l  CRISPR/Cas9 质粒细胞转染方法

l  阳性细胞克隆筛选

l  基因编辑细胞系的建立

l  基因修饰情况分析方法

 

实验三:

gRNA oligos 模板退火CRISPR/Cas9 重组子细菌克隆挑取,扩大化培养,鉴定;

基因修饰基因组 DNA 模板(转染 CRISPR/Cas9 到动物细胞后提取 DNA)制备;

目的靶基因的基因组 DNA 片段的 PCR 扩增,电泳检测 PCR 产物;

PCR 产物退火变性,T7E1 酶切,电泳鉴定基因修饰情况;

 

利用 CRISPR/Cas9 技术构建基因敲除或敲入小鼠

l  基因编辑工具 CRISPR/Cas9 基本背景介绍

l  sgRNA 设计及其功能验证

l  小鼠受精卵分离和培养

l  CRISPR/Cas9 系统显微注射到小鼠受精卵

l  受精卵显微注射后回输到代孕母鼠体内

l  PCR T7E1 分析和鉴定基因敲除小鼠(Founder

l  基因敲除小鼠基因敲除情况分析

l  CRISPR/Cas9 构建基因敲除小鼠详细实验流程归纳和总结

24日下午

13:00-17:00

实验:实验结果的点评与讨论

CRISPR/Cas9 载体构建讨论;

目的靶基因的基因组 DNA 片段的 PCR 扩增,电泳检测 PCR 产物结果讨论;

PCR 产物 T7E1 酶切,电泳鉴定基因修饰情况结果讨论;

Sanger 测序鉴定基因编辑结果;

 

利用 CRISPR/Cas9 技术构建基因修饰大型动物(猪)

l 利用 CRISPR/Cas9 构建基因修饰大型动物(猪)流程

l  基因修饰大型动物优势

l  利用 CRISPR/Cas9 构建基因修饰大动物(猪)模型介绍

 

CRISPR/Cas9 脱靶问题分析

l  脱靶产生的原因

l  脱靶检测方法

l  降低脱靶问题的方法

 

CRISPR/Cas9 技术的发展、应用、拓展及伦理问题

l  新基因编辑工具 Cpf1C2C2 的用法与比较

l  基因编辑工具的伦理问题

l  基因编辑工具的应用拓展

l  根据学员的研究内容,详细答疑如何使用基因编辑工具

 

温馨提示:建议携带笔记本电脑!

 

【开班详情】

时间:2017923-924

地点:上海中兴和泰酒店会议厅(上海市浦东张江高科科苑路866号)

 

【收费标准】

注册费:2700/位(注册费包含电子版教材、午餐,欢迎晚宴费用,住宿费自理。)可以开正规会务发票,纸质邀请函(盖红章)

优惠措施

1. 9 10 号之前确认报名及转账的优惠 200 元;

2. 三人组团报名,每人可优惠200元;

3.  五人组团参会,领队人可以免费注册!  

 

【报名方式】

咨询电话:021-64221770

吴老师:13621602353

周老师:13817742512

 

往期上海基因编辑学习班合影

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